产品货号：
KL2212302
中文名称：
RNA 3'端单核苷酸生物素标记试剂(连接酶法)
英文名称：
RNA 3'-End Mononucleotide Biotin Labeling Kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
使用方法：
相关搜索：RNA 3'端单核苷酸生物素标记试剂(连接酶法)，RNA 3'-End Mononucleotide Biotin Labeling Kit
本制品使用T4 RNA连接酶连接单个生物素化核苷酸到RNA链的3'末端。标记的RNA探针就可以直接用于下游应用，例如RNA电泳迁移率变动测定、
RNA Pull-down测定或miRNA分析。
产品特点：
- 使用生物素化胞苷（双）磷酸盐核苷酸为底物，每次只标记一个分子。
- 快速非放射性标记。
- 可以用任何RNA为模板。
- 反应温和，不会破坏RNA的现有结构。
- 连接效率大于75%。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 10×T4 RNA连接酶反应缓冲液 | 100μL |
| T4 RNA连接酶(10U/μL) | 40μL |
| 非标记RNA对照(干粉) | 20T |
| 生物素化胞苷(双)磷酸盐(0.5mM) | 40μL |
| RNase抑制剂(40U/μL) | 2×10μL |
| 微量核酸沉淀剂 | 2×1mL |
| 50% PEG溶液 | 300μL |
| DEPC处理水 | 1.5mL |
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
非标记RNA对照干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110μL的DEPC处理水充分混匀后得到非标记RNA对照，10μM再使用，未用完的需要-20℃保存。
使用方法：
- 在冰上解冻除了50% PEG溶液和DMSO以外的所有套装里面的管子。
- 在37℃下加热50% PEG溶液5到10分钟，直到体积呈流体状。
- 将5mL未标记RNA对照转移到离心管中，在85℃下，加热3到5分钟过后立即将RNA放在冰上。
- 按下表顺序添加各成分，50% PEG溶液只能最后加入到试剂里面。
成分 对照管 待标记样本管 10×T4 RNA连接酶反应缓冲液 3mL 3mL RNase抑制剂(40U/mL) 1mL 1mL 非标记RNA对照(10mM) 5mL 不加 待标记RNA 10pmol 不加 1-50pmol 生物素化胞苷(双)磷酸盐(0.5mM) 1mL 1mL T4 RNA连接酶(10U/mL) 2mL 2mL 50%PEG溶液 15mL 15mL DEPC处理水 补水到30mL 补水到30mL - 将反应物在16℃下孵育2小时-过夜。
- 在连接反应管中各加入70mL的DEPC处理水。
- 在实验组和对照组中各加入100μL PCI溶液。
- 将混合物放在离心机中高速离心2～3分钟进行分离相。
- 小心地取出顶部(水性)相并转移到无核酸酶管。
- 加入200mL微量核酸沉淀剂，颠倒10次混匀。
- 在4℃下13000×g离心15分钟。
- 小心弃上清液。注意不要干扰沉淀。
- 加入300mL预冷的自备75%乙醇颠倒混匀。
- 4℃下13000×g离心3分钟，小心地去除上清。
- 短暂离心半分钟，吸弃残留上清液，开盖室温放置5分钟左右。
- 将沉淀重悬于20mL的DEPC处理水中待用或放-80℃长期保存。
相关搜索：RNA 3'端单核苷酸生物素标记试剂(连接酶法)，RNA 3'-End Mononucleotide Biotin Labeling Kit